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翻譯：工業(yè)藥劑發(fā)燒友Summer
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長(zhǎng)效注射混懸劑難溶性藥物晶體在體內(nèi)緩慢溶解，可將藥物體內(nèi)釋放時(shí)間延長(zhǎng)到數(shù)周至數(shù)月。迄今為止，F(xiàn)DA已經(jīng)批準(zhǔn)了大約10種長(zhǎng)效注射混懸劑，但大多數(shù)都沒(méi)有等效的仿制藥，很可能是由于復(fù)雜的處方工藝以及建立體外-體內(nèi)相關(guān)性（IVIVC）方面的困難。基于動(dòng)物模型的A級(jí)IVIVC已被證明可用于具有多相釋放特征的復(fù)雜長(zhǎng)效微球。長(zhǎng)效注射混懸劑的釋放特性相對(duì)簡(jiǎn)單，只有一個(gè)藥物溶出階段，因此可建立IVIVC。為了建立長(zhǎng)效注射混懸劑的體內(nèi)外相關(guān)性，以長(zhǎng)效注射醋酸甲羥孕酮（Depo-SubQ Provera 104）為上市參比制劑，制備了四種活性成分相同但處方和工藝（藥物粒度和輔料來(lái)源）不同的醋酸甲羥孕酮長(zhǎng)效注射混懸劑。然后使用兩種基于USP裝置二（帶有浸沒(méi)池）和USP裝置四（帶有半固體適配器）改進(jìn)的體外釋放測(cè)試方法，通過(guò)兔模型研究體內(nèi)釋放，并使用USP裝置四法獲得了體外釋放曲線，成功建立了A級(jí)IVIVC。
長(zhǎng)效注射混懸劑難溶性藥物晶體在體內(nèi)緩慢溶解，可將藥物體內(nèi)釋放時(shí)間延長(zhǎng)到數(shù)周至數(shù)月。迄今為止，F(xiàn)DA已經(jīng)批準(zhǔn)了大約10種長(zhǎng)效注射混懸劑，但大多數(shù)都沒(méi)有等效的仿制藥，很可能是由于復(fù)雜的處方工藝以及建立體外-體內(nèi)相關(guān)性（IVIVC）方面的困難。基于動(dòng)物模型的A級(jí)IVIVC已被證明可用于具有多相釋放特征的復(fù)雜長(zhǎng)效微球。長(zhǎng)效注射混懸劑的釋放特性相對(duì)簡(jiǎn)單，只有一個(gè)藥物溶出階段，因此可建立IVIVC。為了建立長(zhǎng)效注射混懸劑的體內(nèi)外相關(guān)性，以長(zhǎng)效注射醋酸甲羥孕酮（Depo-SubQ Provera 104）為上市參比制劑，制備了四種活性成分相同但處方和工藝（藥物粒度和輔料來(lái)源）不同的醋酸甲羥孕酮長(zhǎng)效注射混懸劑。然后使用兩種基于USP裝置二（帶有浸沒(méi)池）和USP裝置四（帶有半固體適配器）改進(jìn)的體外釋放測(cè)試方法，通過(guò)兔模型研究體內(nèi)釋放，并使用USP裝置四法獲得了體外釋放曲線，成功建立了A級(jí)IVIVC。
IVIVC是一種預(yù)測(cè)數(shù)學(xué)模型，用來(lái)研究不同劑型藥物的體外溶出與體內(nèi)釋放之間的關(guān)系。成功的IVIVC可用于制定釋放/溶出測(cè)試規(guī)范，當(dāng)建立了人體內(nèi)的A級(jí)相關(guān)性時(shí)，可代替體內(nèi)BE研究。在藥物初次批準(zhǔn)過(guò)程中以及在獲批后出現(xiàn)微小變更（例如生產(chǎn)場(chǎng)所變更）時(shí)，IVIVC可以減輕BE研究的臨床負(fù)擔(dān)。迄今為止，關(guān)于IVIVC的建立、評(píng)估和應(yīng)用，僅有一項(xiàng)針對(duì)緩釋口服劑型的FDA指南。因此在過(guò)去20余年里，科學(xué)家們不得不依賴(lài)這一指南來(lái)開(kāi)發(fā)非口服制劑。一項(xiàng)針對(duì)IVIVC研究的行業(yè)調(diào)研顯示，半數(shù)受訪者很少或從未建立過(guò)非口服劑型的IVIVC模型。FDA已批準(zhǔn)的長(zhǎng)效注射混懸劑產(chǎn)品中，只有Invega Sustenna提供了針對(duì)不同粒徑的臨床A級(jí)IVIVC 。近年來(lái)，由于人體研究相對(duì)困難并且昂貴，非臨床動(dòng)物模型已被用于非口服劑型IVIVC的研究，可能為人類(lèi)IVIVC的建立鋪平道路，例如各種聚乳酸-甘氨酸微球制劑如地塞米松、利培酮、納曲酮、醋酸亮丙瑞林，已經(jīng)通過(guò)兔模型成功建立了A級(jí)（點(diǎn)對(duì)點(diǎn)）IVIVC。
在IVIVC模型研究中，根據(jù)所選制劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征，動(dòng)物模型或人體受試者的體內(nèi)吸收（血藥濃度-時(shí)間變化）呈現(xiàn)出恒定的規(guī)律。但當(dāng)使用不同的體外釋放/溶出方法（設(shè)備、釋放介質(zhì)、溫度、攪拌速度和上樣方式）時(shí)，所選制劑的體外釋放曲線可能會(huì)有所不同。因此，選擇合適的體外釋放/溶出方法來(lái)建立IVIVC至關(guān)重要。盡管FDA已經(jīng)推薦了一些長(zhǎng)效注射混懸劑的體外釋放檢測(cè)方法，但它們的持續(xù)時(shí)間較短（30分鐘至2天），可能不足以建立用于長(zhǎng)效注射混懸制劑的IVIVC（體內(nèi)有效持續(xù)時(shí)間為數(shù)周至數(shù)月）。本文開(kāi)發(fā)了一種能夠延長(zhǎng)注射混懸劑體外釋放時(shí)間的方法，有望用于IVIVC的研究。
在IVIVC模型研究中，根據(jù)所選制劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征，動(dòng)物模型或人體受試者的體內(nèi)吸收（血藥濃度-時(shí)間變化）呈現(xiàn)出恒定的規(guī)律。但當(dāng)使用不同的體外釋放/溶出方法（設(shè)備、釋放介質(zhì)、溫度、攪拌速度和上樣方式）時(shí)，所選制劑的體外釋放曲線可能會(huì)有所不同。因此，選擇合適的體外釋放/溶出方法來(lái)建立IVIVC至關(guān)重要。盡管FDA已經(jīng)推薦了一些長(zhǎng)效注射混懸劑的體外釋放檢測(cè)方法，但它們的持續(xù)時(shí)間較短（30分鐘至2天），可能不足以建立用于長(zhǎng)效注射混懸制劑的IVIVC（體內(nèi)有效持續(xù)時(shí)間為數(shù)周至數(shù)月）。本文開(kāi)發(fā)了一種能夠延長(zhǎng)注射混懸劑體外釋放時(shí)間的方法，有望用于IVIVC的研究。
2.1 材料
DMSO （USP級(jí)）購(gòu)自Sigma-Aldrich（St.Louis，MO，USA）。戊烷，磷酸氫二鉀，含0.1%甲酸的乙腈（v/v），LC/MS級(jí)Optima?和含0.1%甲酸（v/v）的水， LC/MS級(jí)Optima?購(gòu)自Fisher Scientific（Hampton，NH，USA）。Depo SubQ Provera 104mg醋酸甲羥孕酮注射混懸液（104mg/0.65mL）購(gòu)自Pfizer Inc。醋酸甲羥孕酮（微粉化，USP級(jí)）購(gòu)自Spectrum Chemical Manufacturing Corp（New Brunswick，NJ，USA）。甲羥孕酮17-乙酸酯-d3（MPA-d3）購(gòu)自TLC Pharmaceutical Standard ltd（Ontario，Canada）。MiniCollect 0.8ml肝素分離管購(gòu)自Greiner Bio-One North America Inc。（Monroe，North Carolina，USA）。除非另有說(shuō)明，否則所有材料均為分析級(jí)。
2.2 MPA混懸液的制備及體外釋放數(shù)據(jù)
首先用四種方法制備MPA混懸劑 ：使用MPA原料藥制備的制劑1（F1）；使用重結(jié)晶制備的制劑2（F2）(反溶劑法:丙酮與水之比為1:1，分別作為良溶劑和反溶劑)；通過(guò)探針超聲處理制備的制劑3（F3）；制劑4（F4）除了使用不同來(lái)源的PEG 3350（F1：來(lái)自Spectrum Chemicals；F4：來(lái)自BASF）外與F1相同。使用馬爾文粒度儀測(cè)定所有制劑的粒徑，記錄Dv10，Dv50和Dv90，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，然后計(jì)算跨度值（（Dv90-Dv10）/Dv50）來(lái)評(píng)估混懸劑的粒度分布，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。
所有MPA混懸劑的體外釋放數(shù)據(jù)均來(lái)自之前的一份報(bào)告，其中使用了兩種裝置，分別為帶有浸沒(méi)池（4cm2接觸面積）的USP裝置二（推薦使用華溶儀器DS-1206AT全自動(dòng)取樣溶出系統(tǒng)）和帶有半固體適配器（1mm深度）的USP裝置四 (圖1)（推薦使用華溶儀器DS-7CP流池法溶出系統(tǒng)）。
2.3 MPA混懸劑的體內(nèi)釋放研究
2.3.1 MPA混懸劑的動(dòng)物研究
以兔為模型研究了MPA混懸劑和商業(yè)產(chǎn)品Depo SubQ Provera 104在體內(nèi)的釋放情況。將體重約4kg的雌性新西蘭白兔隨機(jī)分配到每個(gè)制劑組（n=6）。將每種制劑以26mg/kg的劑量皮下注射（0.65mL）。為了獲得藥物PK參數(shù)，MPA藥物溶液（在DMSO中）也以4 mg/kg的劑量進(jìn)行靜脈注射（n=6）。以預(yù)定的間隔從耳緣靜脈收集血液樣品并置于肝素分離管中。樣品在5000rpm的速度下離心5分鐘得到血漿，然后在-80℃環(huán)境下儲(chǔ)存直到分析。本研究動(dòng)物模型的選擇是基于以下幾點(diǎn)原因:（1）PK研究的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)3個(gè)月，為確保有足夠的血容量用于長(zhǎng)時(shí)間的連續(xù)采樣，認(rèn)為較大的動(dòng)物（如兔子）比較合適;（2）MPA用于避孕，因此選擇雌性動(dòng)物。為保證動(dòng)物試驗(yàn)的安全性，本研究所采用的給藥劑量均按相關(guān)文獻(xiàn)規(guī)定，并確保給藥后的血藥濃度能被檢測(cè)出來(lái)，本研究按照康涅狄格大學(xué)機(jī)構(gòu)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)（IACUC）審查和批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。
2.3.2 樣品制備
超高效液相色譜（UPLC）
采用Vanquish UPLC系統(tǒng)（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA）進(jìn)行樣品分離。并使用Kinetex EVO C18 （50 mm*2.1 mm, 2.6μm）和帶有SecurityGuard?超濾筒的預(yù)柱（Phenomenex Inc, Torrance, CA, USA），將柱溫箱溫度設(shè)置為30℃。流動(dòng)相由兩種溶劑混合物組成，A為含0.1% v/v甲酸的水；B為含0.1% v/v甲酸的乙腈； LC/MS級(jí)Optima)，用8分鐘梯度法（表1）以0.3 mL/min的流速洗脫系統(tǒng)，進(jìn)樣體積為20μL。
在全掃描模式下使用配備OptaMax?NG電噴霧(H-ESI)離子源(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)的Thermo Scientific?高分辨率Orbitrap Exploris?480質(zhì)譜儀 (質(zhì)量范圍:2500 - 425.00m/z，分辨率:120,000)。對(duì)MS參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化來(lái)獲得目標(biāo)藥物分子的最佳強(qiáng)度。離子源參數(shù)設(shè)置如下：噴霧電壓為3700V的正離子模式;護(hù)套氣體流量為70Arb;輔助氣體流量為23Arb;掃掠氣體流量為5Arb;離子轉(zhuǎn)移管溫度為400°C;汽化器溫度為525°C。方法總時(shí)間為8min。藥物MPA和內(nèi)標(biāo)（MPA-d3）的親本離子質(zhì)量分別為387.2525m/z和390.2700m/z。通過(guò)Thermo Scientific Xcalibur?軟件(4.4版本)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析。
MPA和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間均為4.81min。除最低濃度（0.5ng/mL）的回收率約為70%外，其他濃度MPA的回收率均在90%-101%范圍內(nèi)。校準(zhǔn)曲線建立在0.5-50 ng/mL和50-1000ng/mL范圍內(nèi)，線性良好（R2>0.9995），準(zhǔn)確度小于15%，精密度小于10%。
2.4 統(tǒng)計(jì)分析
使用OriginPro 2017軟件（OriginLab Corporation）進(jìn)行線性回歸和擬合。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）表示。
2.5 IVIVC建立
為了研究用于MPA混懸劑的IVIVC，使用Phoenix WinNonlin軟件和IVIVC工具包（版本6.4，Certara Inc.，NJ，USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。目前的研究集中在A級(jí)IVIVC（體外溶出度與體內(nèi)釋放速率之間的點(diǎn)對(duì)點(diǎn)關(guān)系），因此它是最具參考性的，以下是數(shù)據(jù)分析的三個(gè)主要步驟。
步驟1：體外數(shù)據(jù)輸入
步驟2：體內(nèi)釋放數(shù)據(jù)輸入
在軟件中通過(guò)數(shù)據(jù)反卷積處理獲得所選MPA混懸劑的體內(nèi)釋放曲線。以靜脈注射劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征為參考。設(shè)定單位脈沖響應(yīng)（UIR）指數(shù)的最大值為2，采用Akaike模型進(jìn)行數(shù)據(jù)反卷積。
步驟3：預(yù)測(cè)和驗(yàn)證相關(guān)性
通過(guò)軟件計(jì)算得到吸收比例因子（scaling factor for absorption）、時(shí)間比例因子（scaling factor for time）、時(shí)移因子（time shifting factor），用不同的縮放和/或移位因子建立體外和體內(nèi)釋放數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，在此基礎(chǔ)上對(duì)所建立的IVIVC進(jìn)行驗(yàn)證，并對(duì)AUC和Cmax的預(yù)測(cè)誤差百分比（%PE）進(jìn)行分析。根據(jù)FDA口服緩釋劑型IVIVC研究指南 ，IVIVC % PE的合格標(biāo)準(zhǔn)是:（1)對(duì)于體內(nèi)預(yù)測(cè)性，Cmax和AUC的平均% PE≤10%。此外，每種制劑的%PE不應(yīng)超過(guò)15%;（2）如果體內(nèi)預(yù)測(cè)性不確定，則應(yīng)通過(guò)體外預(yù)測(cè)性來(lái)最終確定IVIVC是否能夠替代BE;（3）對(duì)于體外預(yù)測(cè)性，Cmax和AUC的%PE應(yīng)≤10%。
3.1 粒徑與粒徑分布
表2列出了MPA混懸劑（F1、F2、F3和F4）及RLD的粒徑和粒徑分布。排列順序如下：F3
3.2 所有制劑的體內(nèi)藥物釋放
以家兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，對(duì)MPA混懸劑和RLD進(jìn)行體內(nèi)藥物釋放研究。為了獲得PK曲線，所有制劑均經(jīng)皮下注射 (圖2B)。還進(jìn)行靜脈注射藥物溶液（圖2A）用于反卷積處理獲得PK參數(shù)。為了獲得PK曲線的清晰視圖，圖3A顯示了平均值曲線。使用Phoenix WinNonlin對(duì)所有制劑的體內(nèi)釋放曲線進(jìn)行反卷積。反卷積建立在非區(qū)室分析（NCA）的基礎(chǔ)上，詳細(xì)的方程推導(dǎo)可以在（Certara.com）中找到。為便于比較，還展示了先前報(bào)道的測(cè)試制劑的平均體外釋放曲線（圖3CD），粒徑是分散體系（混懸劑、納米顆粒、脂質(zhì)體）中的重要屬性，本研究重點(diǎn)考察了藥物粒徑對(duì)長(zhǎng)效注射混懸劑在體外和體內(nèi)釋放特性的影響。
正如預(yù)期的那樣，藥物的粒徑顯著影響了體外和體內(nèi)的釋放曲線。粒徑越大，在體內(nèi)外的藥物釋放速率越慢。F1，F(xiàn)2，F(xiàn)4和RLD的體內(nèi)與體外釋放顯示出相同的次序（圖3CD）。但是F3并沒(méi)有遵循相同的規(guī)律，它的粒徑最小，預(yù)計(jì)在體內(nèi)釋放最快，相反，F(xiàn)3在體內(nèi)藥物釋放最緩慢。進(jìn)一步的研究表明，F(xiàn)3在體外并不穩(wěn)定，室溫下隨著時(shí)間的推移容易發(fā)生聚集，其粒徑（Dv50）在5天的時(shí)間內(nèi)一直增加到20 μm左右（圖4A）。此外，F(xiàn)3的跨度值也從2.61下降到1.5以下 (圖4B），表明F3的粒徑分布隨著時(shí)間的推移而變窄。因此，F(xiàn)3顆粒在注射部位的聚集是造成體內(nèi)釋放緩慢的重要原因之一。此外，也有可能F3在體內(nèi)快速溶解，然后在注射部位沉淀或再結(jié)晶，形成了更大粒徑的顆粒，從而減緩藥物釋放。由于建立IVIVC的最基本原則是體外和體內(nèi)的結(jié)果應(yīng)一致，因此F3并未包括在體內(nèi)外相關(guān)性的研究中。
通過(guò)調(diào)整藥物粒徑（F1、F2和F3）和改變PEG 3350的賦形劑來(lái)源（F1和F4），制備了具有不同釋放速率的MPA混懸劑，雖然使用完全相同的懸浮介質(zhì)，但藥物顆粒不一定具有物理穩(wěn)定性，以探針超聲法制備的F3為例，在常溫常壓條件下粒徑隨時(shí)間增長(zhǎng)，初始粒徑（Dv50）約為3μm，到第5天粒徑約為20μm。在體外釋放試驗(yàn)中并未觀察到粒徑的變化，這很可能是因?yàn)樵诼┎蹢l件下釋放介質(zhì)具有稀釋效應(yīng)，但在兔體內(nèi)釋放實(shí)驗(yàn)中觀察到藥物顆粒的聚集效應(yīng)。這些結(jié)果說(shuō)明了不同的工藝條件可以影響粒子的穩(wěn)定性，所以在不同工藝條件下制備混懸劑是具有挑戰(zhàn)性的，表明了精確控制長(zhǎng)效注射混懸劑粒徑的重要性。
3.3 MPA混懸劑的IVIVC研究
根據(jù)之前關(guān)于MPA混懸劑釋放測(cè)試方法開(kāi)發(fā)的報(bào)道，使用帶浸沒(méi)池的USP裝置二（圖3C）和帶半固體適配器的USP裝置四（圖3D）顯示出良好的釋放特性，可以嘗試建立A級(jí)IVIVC。使用兩種裝置可獲得較長(zhǎng)時(shí)間釋放曲線 (至少一周），具有可接受的再現(xiàn)性和區(qū)分不同粒徑MPA混懸劑的能力。在A級(jí)IVIVC的研究中，理想情況是體內(nèi)釋放部分與體外溶出部分之間有1:1的關(guān)系。如果體外釋放持續(xù)時(shí)間接近制劑的體內(nèi)療效持續(xù)時(shí)間，則有可能建立無(wú)時(shí)間縮放和轉(zhuǎn)換或最小時(shí)間縮放和轉(zhuǎn)換的IVIVC。與目前FDA推薦的用于其他長(zhǎng)效注射混懸劑產(chǎn)品的方法（30分鐘至2天）相比，這兩種方法體外釋放持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)得多（USP裝置二為2周，USP裝置四為1周），但仍比體內(nèi)療效持續(xù)時(shí)間（3個(gè)月）短得多（圖3CD）。
使用WinNonlin IVIVC工具包進(jìn)行MPA混懸劑的IVIVC研究，將體外數(shù)據(jù)與所選制劑的體內(nèi)釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。
3.3.1 使用USP裝置二（帶浸沒(méi)池）獲得的體外釋放數(shù)據(jù)
首先，從帶浸沒(méi)池的USP裝置二中獲得了四種制劑F1， F2， F4和RLD的體外數(shù)據(jù)。F2、F4和RLD作為體內(nèi)制劑，F(xiàn)1作為體外制劑，采用雙Weibull模型擬合效果最佳。通過(guò)縮放和移位的方法，吸收分?jǐn)?shù)和釋放分?jǐn)?shù)之間的IVIVC線性回歸擬合系數(shù)（R2值）為0.9377（圖5A）。使用建立的IVIVC將預(yù)測(cè)與觀察到F1在體內(nèi)的釋放情況進(jìn)行比較（圖5B）。結(jié)果表明兩條曲線在一些時(shí)間間隔內(nèi)重疊，但在其他時(shí)段具有明顯的區(qū)別。
吸收比例因子（scaling factor for absorption）和時(shí)間比例因子（scaling factor for time）分別為0.91和0.17，時(shí)移因子（time shifting factor）為0.31。IVIVC驗(yàn)證總結(jié)如表3所示。對(duì)于體內(nèi)預(yù)測(cè)性，AUC的%PE符合標(biāo)準(zhǔn)（個(gè)體%PE＜15%，平均%PE＜10%），但Cmax的%PE＞10%。因此使用USP裝置二（帶浸沒(méi)池）獲得的體外釋放數(shù)據(jù)并不能建立A級(jí)IVIVC
3.3.2 使用USP裝置四（帶半固態(tài)適配器）獲得的體外釋放數(shù)據(jù)
使用USP裝置四方法獲得體外釋放數(shù)據(jù)，選擇三種或四種制劑用于IVIVC的研究。
3.3.2.1 三種制劑（F1、F4和RLD）
F1和RLD作為體內(nèi)制劑，F(xiàn)4作為體外制劑，Hill和Weibull模型均較好地?cái)M合了體外釋放曲線，僅使用縮放方法就能建立和驗(yàn)證IVIVC。Hill和Weibull模型的IVIVC線性回歸擬合系數(shù)（R2值）分別為0.9586和0.9599（圖6A和6C）。通過(guò)建立的IVIVC對(duì)F4制劑的體內(nèi)釋放曲線進(jìn)行預(yù)測(cè)和觀察，除了曲線末端的幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)外均顯示出良好的一致性 (圖6B和6D)。采用Hill和Weibull模型，吸收比例因子（scaling factor for absorption）分別為0.91和0.93，時(shí)間比例因子（scaling factor for time）均為0.06。表4通過(guò)體外釋放數(shù)據(jù)的Hill和Weibull模型對(duì)IVIVC驗(yàn)證進(jìn)行了總結(jié)。對(duì)于不同的模型，IVIVC的預(yù)測(cè)性略有差異，比如使用Hill和Weibull模型，由于F1制劑Cmax的%PE絕對(duì)值較高，體內(nèi)預(yù)測(cè)性是不準(zhǔn)確的。但對(duì)于AUC和Cmax，體外預(yù)測(cè)性的%PE均在10%以?xún)?nèi)（Hill模型：AUC和Cmax的%PE分別為-9.81%和7.67%；Weibull模型：AUC和Cmax的%PE分別為- 8.61%和-9.76%）。根據(jù)FDA關(guān)于IVIVC緩釋片口服劑型申請(qǐng)指南，當(dāng)體內(nèi)預(yù)測(cè)性不準(zhǔn)確時(shí)，若體外預(yù)測(cè)性的AUC和Cmax的%PE絕對(duì)值均小于10%，可采用體外預(yù)測(cè)性進(jìn)行IVIVC的評(píng)價(jià)。因此，使用F1、F4和RLD三種制劑成功建立了A級(jí)IVIVC，并使用USP裝置四獲得了體外釋放數(shù)據(jù)。
3.3.2.2 四種制劑（F1、F2、F4和RLD）
F1、F2和RLD作為體內(nèi)制劑，F(xiàn)4作為體外制劑。使用Hill和Weibull模型均可獲得擬合度高的體外釋放曲線。但使用Hill模型擬合的體外數(shù)據(jù)獲得IVIVC體外預(yù)測(cè)性的%PE值略超出標(biāo)準(zhǔn)（AUC的%PE值為-9.49%，Cmax的%PE值為12.26%)。因此，在IVIVC建立過(guò)程中選擇Weibull模型進(jìn)行體外釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行建模，建立IVIVC并使用縮放方法進(jìn)行驗(yàn)證。使用F1、F2和RLD，吸收和釋放分?jǐn)?shù)之間的線性回歸擬合系數(shù)（R2值）為0.9664(圖7A)。觀察和由IVIVC預(yù)測(cè)的體內(nèi)曲線在多數(shù)時(shí)間段有重疊（圖7B）。吸收和時(shí)間比例因子分別為0.92和0.06。IVIVC驗(yàn)證總結(jié)如表5所示。與使用三種制劑建立的IVIVC類(lèi)似，F(xiàn)1和F2 %PE絕對(duì)值較高，體內(nèi)預(yù)測(cè)性不確定。但AUC（-9.07%）和Cmax（-5.06%）的%PE均在體外預(yù)測(cè)性的誤差范圍內(nèi)（10%）。因此，使用四種MPA混懸劑和從USP裝置四獲得的體外釋放數(shù)據(jù)成功建立了A級(jí)IVIVC，并且比較了四種制劑預(yù)測(cè)和觀察到的PK曲線（圖8）。由于Cmax的 %PE絕對(duì)值高，低估了F1和F2的Cmax預(yù)測(cè)值。相反，F(xiàn)4和RLD的Cmax預(yù)測(cè)值與觀察到的Cmax顯示出良好的一致性。由于目前關(guān)于長(zhǎng)效注射混懸劑的IVIVC研究文獻(xiàn)報(bào)道很少，這類(lèi)制劑的Cmax中%PE較高的原因尚不清楚，預(yù)測(cè)誤差較大可能是因?yàn)椋海?）建模所用的數(shù)據(jù)為平均值，Cmax值可能發(fā)生偏移；（2）體外與體內(nèi)釋放條件有很大區(qū)別，而且要同時(shí)考慮到給藥過(guò)程中對(duì)制劑產(chǎn)生的全部生理及生物學(xué)效應(yīng)很難做到；（3）隨著時(shí)間的推移，制劑可能在注射部位發(fā)生變化，例如沉淀、再結(jié)晶和聚集。
3.4 IVIVC研究的考慮因素
3.4.1 體外釋放模型
本研究使用三種不同的模型（Hill、Weibull和雙Weibull）進(jìn)行體外釋放曲線的數(shù)據(jù)分析。USP裝置二獲得的釋放曲線在使用雙Weibull模型時(shí)擬合最佳，而USP裝置四獲得的釋放曲線在使用Hill和Weibull模型時(shí)擬合最佳。在通過(guò)三種制劑（F1、F4和RLD）研究IVIVC的過(guò)程中，使用USP裝置四和Hill或Weibull模型成功建立了A級(jí)IVIVC。但通過(guò)四種制劑（F1、F2、F4和RLD）研究IVIVC時(shí)，只有使用Weibull模型擬合體外數(shù)據(jù)才能建立A級(jí)IVIVC，因此選擇合適的模型對(duì)IVIVC研究至關(guān)重要。
3.4.2 體內(nèi)釋放數(shù)據(jù)和IVIVC研究
FDA指南并未規(guī)定建立IVIVC所需要的方法，只要所用模型在不同的IVIVC類(lèi)別下具有可接受的%PE即可。通過(guò)IVIVC開(kāi)發(fā)的長(zhǎng)效注射混懸劑均能滿(mǎn)足所有制劑的AUC標(biāo)準(zhǔn)（個(gè)體%PE<15%）。但是一些體內(nèi)和體外制劑Cmax的%PE絕對(duì)值高，導(dǎo)致通過(guò)USP裝置二無(wú)法建立A級(jí)IVIVC。相比之下，盡管USP裝置四的體內(nèi)預(yù)測(cè)性不準(zhǔn)確，但仍成功建立了A級(jí)IVIVC。
這是關(guān)于長(zhǎng)效注射混懸劑臨床前（兔模型）IVIVC研究的第一份報(bào)告。通過(guò)USP裝置四使用三種或四種制劑獲得了體外釋放數(shù)據(jù)，成功建立了A級(jí)IVIVC。由于制劑的Cmax的預(yù)測(cè)誤差值較高，不能使用USP裝置二獲得的體外數(shù)據(jù)來(lái)建立IVIVC，因此在長(zhǎng)效注射混懸劑的體外釋放方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，出于產(chǎn)品質(zhì)量控制和IVIVC研究的目的，可以?xún)?yōu)先考慮USP裝置四方法。藥物粒徑顯著影響體外和體內(nèi)釋放過(guò)程，被認(rèn)為是長(zhǎng)效注射混懸劑開(kāi)發(fā)中的一個(gè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性。體外釋放模型的選擇（Hill、Weibull和雙 Weibull等）可能會(huì)改變IVIVC建立的最終結(jié)果，因此在數(shù)據(jù)分析中必須仔細(xì)考慮。所建立的IVIVIC將為長(zhǎng)效注射混懸劑的處方篩選和優(yōu)化，以及體外釋放方法研究提供科學(xué)依據(jù)。
略
