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翻譯：華溶應用中心
審核：工業藥劑發燒友
簡介：
從歷史上看，為了證明生產工藝或輔料的變更對產品的質量、療效和一致性的影響，需對半固體藥物產品進行生物利用度/生物等效性研究，這類研究工作一直具有挑戰性。體外測試如溶解度、粒徑、活性成分釋放率和產品均勻性的測定，已成為考察產品均勻性和質量等效性的主要指標。其中，活性成分的體外釋放試驗(IVRT)因《非無菌半固體劑型工藝指南》(SUPAC-SS)的頒布而備受關注。
許多外用藥物制造商在藥物開發過程中投入了大量資源來開發和驗證IVRT。然而，正如工廠檢驗計劃意見書所指出的那樣，沒有一個標準的測試方案可以適用于所有半固體劑型。本研究采用Franz擴散池對不同半固體制劑中的維甲酸進行了釋放試驗，測試的產品是含有維甲酸的乳膏。使用維甲酸開發并驗證IVRT，然后將IVRT方法應用于制劑開發，并證明工藝變更的影響。選擇維甲酸是因為它有較多規格類型可以提供研究，且前人對維甲酸乳膏中維甲酸的釋放研究比較充分。
1、試驗方法：
雖然通常有一種測定方法可用于測定目標原料藥及其相關化合物，但這種方法可能不適合原料藥在特定的接收介質下進行檢測。在大多數情況下，在選定的接收介質中分析這些化合物時，為了保證IVRT結果的可靠，需要對方法進行一定程度的修改，并對修改后的方法進行完整的驗證。對測定方法進行了修改，以測定含有30-35%乙醇的磷酸鹽緩沖液(pH 5.5)中的微量維甲酸，經過實驗30-35%乙醇被證明是維甲酸釋放的適當有機相范圍。
2、膜的選擇:
所選擇的膜應為試驗試劑提供持續的惰性接觸表面，允許活性成分從劑型中釋放時容易擴散到接收介質中，而不能成為限速屏障。重要的是要確認膜和制劑之間沒有物理或化學的相互作用。在許多情況下，制劑中存在的輔料可能影響膜的物理完整性，制劑的活性成分還可能與膜結合發生粘附，難以擴散。此外，膜不應含有任何可能干擾活性成分測定的可浸出物。在方法開發之初，常用的膜有Tuffryn、聚醚砜樹脂、纖維素、醋酸纖維素、尼龍、特氟龍和聚碳酸酯。建議在IVRT實驗預期的上限和下限濃度范圍內，選幾個濃度水平制備受試化合物在接收介質中的標準溶液，用于驗證藥物與膜的結合程度。用市售的過濾器將測試的膜裝好，將維甲酸標準溶液通過這些膜進行過濾，并分析過濾后標準溶液中視黃酸的回收率。
對含維甲酸的制劑，參照文獻選取濃度為0.1、0.02 μg/ml的藥物進行膜吸附檢測。在篩選的膜中，聚砜樹脂膜和Tuffryn膜在低水平(0.02 μg/ml)下對維甲酸有明顯吸附。高效液相色譜(HPLC)顯示，醋酸纖維素膜回收率最高，無正干擾(表1)。因此，選擇醋酸纖維素膜進行進一步的方法開發和驗證。
許多研究者建議用接收介質或0.5%肉豆蔻酸異丙酯浸泡膜進行預處理。然而，對于維甲酸乳膏，膜的預處理對總體釋放曲線幾乎沒有影響。
3、接收介質選擇:
雖然希望接收介質與皮膚的生理狀況相似，但也必須確保藥物有足夠的釋放可以無偏差地被測量，選擇接收介質時最重要的因素是活性成分在介質中的溶解度，接收介質需要為活性成分從半固體制劑中釋放提供外部的擴散條件。Q(累積釋放量)與√T(時間的平方根)的關系是從Higuchi模型推導出來的，該模型假設始終有藥物儲庫可用。根據經驗，在實驗結束時，釋放到介質中的劑量不應超過所使用劑量總量的30%。
介質的pH值也是一個需要考慮的重要因素。介質的水性組分pH值應基于制劑的pH值、活性成分的pH-溶解度曲線和目標膜的pH值來選擇。對于接收介質，一個實際的考慮因素是選擇的接收介質應滿足在合適時間內釋放足量活性成分，以確保準確分析樣品釋放速率。
維甲酸在乙醇接收介質中的溶解度足以滿足上述所有要求。經過幾次初步實驗后，選擇含有35%乙醇的pH3.5磷酸鹽緩沖液作為接收介質，該介質允許足夠水平的維甲酸從制劑中釋放并通過膜擴散，以準確分析維甲酸釋放情況。使用pH3.5和pH5.5緩沖液（分別為受試制劑的pH和皮膚pH）對幾種試驗用制劑進行平行檢測，0.025%維甲酸乳膏的釋放速率在pH 3.5緩沖液中較快，而某些原研制劑（8和9）在這兩種pH緩沖接收介質中的釋放速率幾乎沒有差異（表2）。我們將pH5.5的緩沖液:乙醇(65:35 v/v)作為進一步實驗的接收介質。乙醇濃度的小幅度變化不會導致維甲酸釋放率發生顯著變化。(圖1)。
4、設備相關參數的選擇和藥物釋放度計算:
在進行釋放試驗時應考慮以下具體的設備相關參數。儀器通常使用6個Franz擴散池用于釋放試驗（推薦使用華溶TD-12AT透皮擴散系統）。推薦使用華溶TD-12AT透皮擴散系統試驗溫度在大多數情況下，當劑型應用于皮膚時，32℃是合適的。特殊情況是，當劑型應用于管腔膜，如陰道粘膜，在這種情況下，37℃更合適。我們本次研究所有的實驗都使用32℃。
取樣時間點（h）：0.5、1、2、4、6、8、24、48。
取樣體積：每個時間點取樣0.2ml，每次用新鮮介質補液。
計算：維甲酸在膜單位表面積上的累積釋放量(Q)為：
n-1 Q= {CnV+∑CiS}/A i=1
其中
Q =膜單位面積維甲酸累積釋放量（μg/cm）
Cn =第n個采樣間隔測定的維甲酸濃度（μg/ml）
V =單個Franz擴散池的體積
n-1 ∑Ci =在采樣間隔1到 n-1期間測定的維甲酸濃度之和(μg/ml)
i=1
S =取樣等分液的體積，0.2 m
A =樣品孔的表面積。本次實驗表面積為1.767 cm2
通常，需要對具有已知差異的制劑進行驗證。在這種情況下，該方法首先使用已上市產品retin-A乳膏進行驗證，確認方法的可行性，然后將驗證后的方法應用于具有已知差異的自制制劑，以確認該方法對正在進行工藝探索的不同制劑的區分能力。
驗證的內容
(1)、重現性:評價儀器的長期穩定性、方法的穩定性、 操作對結果的影響等
(2)、準確度:不同時間測試的同一制劑批次之間的一致性
(3)、劑量規格對釋放速率的影響
(4)、組成變化對釋放速率的影響
(5) 、工藝參數變化對釋放速率的影響
(6)、劑型粘度變化對釋放速率的影響
1、重現性: 評價儀器的長期穩定性、方法的穩定性、 操作對結果的影響等
在沒有Franz擴散池重現性考察標準品的情況下，使用內部標準品Retin-A乳膏0.025%作為參比制劑。此外，還計算了樣品釋放時間平方根(x軸)和單位面積累計釋放量(y軸)所描述的直線的斜率和相關系數。相關系數< 0.98的直線不符合要求
2、 準確度: 同一成分在不同時間測試的批次之間的“一致性”
若用具有相同成分和相同制備工藝的維甲酸乳膏在不同時期試驗，這些制劑應有非常相似的釋放速率。表3顯示了一個示例。
3、計量對釋放速率的影響
在上述條件下，測定了劑量規格為0.025%、0.05%和0.1%的維甲酸乳膏中維甲酸釋放情況 (上樣量都一致，但規格不同)，評價規格對釋放速率的影響。圖2顯示了這些處方中維甲酸的釋放曲線。在pH 5.5磷酸鹽緩沖液:乙醇(65:35 v/v)溶液中維甲酸乳膏的藥物釋放速率和釋放總量成正比。圖3顯示了三批相同的自制維甲酸制劑的釋放曲線，兩批為0.025%，一批為0.05%。雖然初始釋放速度較慢，但與在維甲酸乳膏中觀察到的釋放量和釋放速度比值相同。因此，在試驗的第一個小時后，釋放藥物的平均累積量與時間平方根之間存在線性相關性。
4、組成變化對釋放速率的影響
圖4顯示了兩種0.025%規格制劑中維甲酸的釋放。采用相同工藝生產，制劑1幾乎未釋放出視黃酸，而制劑2釋放出大量維甲酸，制劑2含有兩倍量的潤滑劑和其他調節劑。
圖5-7顯示了三組自制制劑中維甲酸的釋放，其中制劑之間的唯一差異是是否存在滲透促進劑。在圖5和圖6中，添加了該成分的維甲酸釋放量更高，而在圖7中，兩種制劑的釋放量沒有顯著差異。請注意，這些制劑的粘度存在差異，這可能會對藥物釋放產生影響。(見下面的討論)
5、工藝參數變化對釋放速率的影響
表4顯示了維甲酸完全直接溶解在油相或者預溶于有機溶劑中的兩種制劑。當藥物全部或部分預溶于有機溶劑時，維甲酸的釋放量更大。從實驗室規模擴大到生產規模是一個必須評估的變量。對于劑型研究，批量從3KG擴大至100 KG對自制制劑3的釋放率沒有影響，但對自制制劑2的釋放有顯著影響。表5顯示了不同規模生產的自制制劑的藥物釋放比較結果。
6、粘度變化對釋放速率的影響
粘度是半固體劑量的關鍵屬性之一，觀察到粘度變化對維甲酸從原研制劑中釋放的有顯著影響。表6和表7顯示了黏度增強劑對這些處方中藥物釋放的影響。在表6中自制制劑1-4、5-7和8-11均顯示出相似的趨勢，即維甲酸的釋放量與制劑中粘度度增強劑的量成反比。
在表7中，自制制劑1-6顯示了組分變化和粘度變化對維甲酸釋放的綜合影響。其對制劑組1-2和3-4之間的釋放曲線影響顯著，對制劑5和6之間的影響不太明顯 (見圖5-7)。然而，制劑1和2、3和4以及5和6均顯示出類似的趨勢，即藥物釋放與制劑中的粘度增強劑的量成反比。
(1)、維甲酸的IVRT可以區分制劑的處方組成、生產工藝和粘度的變化。
(2)、本研究為維甲酸制劑開發中IVRT提供了一種評估藥品質量和SUPAC-SS要求的“一致性”的有用工具。
(3)、應注意，IVRT僅對那些被測試的參數有
(4)、必須具體確定乙醇(在接收質中)反擴散對制劑的影響，以及每種方法變量“靈敏度”(最小鑒別濃度差異)，作為完整方法驗證的一部分。
略
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